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技術(shù)文章

從兔單抗到重組兔單抗

更新時(shí)間:2023-10-13 瀏覽次數(shù):5517

       自 1998 年起,Abcam 始終致力于為的科學(xué)家提供各種生物試劑和試劑盒。為了滿足不斷變化的科研需求,Abcam投入大量人力物力開發(fā)新技術(shù)。

      十多年前,醫(yī)學(xué)家朱偉民一手打造出了 Abcam 的 RabMAb® 抗體平臺(tái)。該平臺(tái)出品的抗體現(xiàn)已廣泛用于的研究、診斷和治療領(lǐng)域。

      *,RabMAb 一抗的制備有別于常規(guī)的利用小鼠或大鼠的生產(chǎn)方法,而是利用了*的技術(shù)“兔單克隆抗體生產(chǎn)方法”。

     
      其基本原理與制備小鼠單克隆抗體相似。

       兔融合伴侶細(xì)胞能與兔 B 細(xì)胞融合,形成兔雜交瘤細(xì)胞——真正的兔-兔雜交瘤細(xì)胞 。隨后篩選雜交瘤細(xì)胞以選擇具有特異和敏感的抗原識(shí)別能力的克隆體,并采用多種方法鑒定抗體(參見下圖的 RabMAb 生產(chǎn)工藝)。

      

      兔與其他物種,如小鼠、大鼠、雞相比,擁有*的免疫系統(tǒng)。它有很大的B細(xì)胞反應(yīng)庫(repertoire),這意味著它們可產(chǎn)生多樣的抗體。

 

      兔免疫系統(tǒng)的親和力優(yōu)化機(jī)制也比小鼠和其他嚙齒動(dòng)物更有效。可利用兔產(chǎn)生這些高親和力的抗體,甚至是針對(duì)在小鼠中不具有免疫原性的抗原也能產(chǎn)生抗體。平均而言,兔單克隆抗體對(duì)靶抗原的親和力是小鼠單克隆抗體的 10-100 倍。由于具有更大且更多樣的 B 細(xì)胞反應(yīng)庫,兔抗體在區(qū)分諸如表位變異(如修飾)、突變和構(gòu)象變化等細(xì)微差別方面也更具優(yōu)勢(shì)。

 

      然而無論基于動(dòng)物來源,還是基于雜交瘤的抗體制備過程,都可能會(huì)面臨批次差異這樣的問題:有的時(shí)候小鼠抗體初表現(xiàn)良好,但在后續(xù)批次中卻無法產(chǎn)生相同的結(jié)果。

      這可能是由于雜交瘤細(xì)胞系漂移、基因丟失或突變。盡管多克隆抗體在生命科學(xué)研究中始終發(fā)揮著重要作用,但批間差異會(huì)更加頻繁地出現(xiàn)。

 

      為了向用戶提供具有優(yōu)異靈敏度和*一致性的抗體,abcam設(shè)計(jì)了 RabMAb 兔單抗的重組版本。這種組合可提供多種*優(yōu)勢(shì)。

       重組抗體是通過將免疫特異性重鏈和輕鏈抗體克隆到高產(chǎn)的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中而制成的。將得到的載體引入到表達(dá)宿主(如細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物)中,用于生產(chǎn)高質(zhì)量的功能性抗體。可在體外通過克隆 ScFV 或 Fab 形成 Ig 框架來構(gòu)建重組抗體,也可從現(xiàn)有的雜交瘤細(xì)胞中產(chǎn)生重組抗體。在基于雜交瘤的重組抗體制備中,常用的是小鼠、大鼠和兔模型。然而,只要有適當(dāng)?shù)墓押塑账嵋锟捎茫蓮娜魏挝锓N中開發(fā)重組抗體。

       重組抗體的優(yōu)勢(shì)

      與傳統(tǒng)的單克隆抗體和多克隆抗體相比,重組抗體具有若干優(yōu)點(diǎn):

      1、更高的一致性和重復(fù)性

      因?yàn)橹亟M抗體是由一組*的基因發(fā)展而來的,所以抗體生產(chǎn)是可控且可靠的。可以避免雜交瘤細(xì)胞制備中的一些問題,如基因丟失、基因突變和細(xì)胞株漂移等。這使得抗體的批次間差異非常小,從而為您提供高度可重復(fù)的結(jié)果。 
 

      2、更高的靈敏度和特異性

      利用重組技術(shù),更容易通過抗體工程提高抗體特異性和靈敏度。所需克隆的選擇過程發(fā)生在雜交瘤細(xì)胞和重組克隆階段,這使我們能夠選擇合適的抗體質(zhì)量。

 

      3、易于擴(kuò)展

      隨著抗體基因的分離,與傳統(tǒng)單克隆技術(shù)相比,抗體表達(dá)能夠以任何規(guī)模在更短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。這意味著我們可以在數(shù)周而非數(shù)月內(nèi)產(chǎn)生定制抗體。

 

      4、無動(dòng)物高通量生產(chǎn)

      一旦分離出產(chǎn)生抗體的基因,就可以實(shí)現(xiàn)無動(dòng)物體外生產(chǎn)。

 

      當(dāng)前,abcam擁有超過 10,000 種重組 RabMAb 抗體,其中很多都是經(jīng)過KO敲除驗(yàn)證的,同時(shí)保證了檢測(cè)結(jié)果的一致性和重復(fù)性。

      而且重組 RabMAb 抗體還在關(guān)鍵應(yīng)用(WB、IHC、ICC/IF、IP 和流式細(xì)胞術(shù))和物種(人、小鼠和大鼠)中進(jìn)行了驗(yàn)證,可以滿足絕大多數(shù)科研工作者的需求。

 

      在此建議所有抗體使用者在購買抗體時(shí)關(guān)注重組及特異性數(shù)據(jù)。

 

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